프로세시티를 향상시키고 시험관 내에서 성능을 개선하기 위한 DNA 중합효소 설계의 새로운 전략

복제 DNA 중합효소가 높은 프로세시티를 달성할 수 있도록 허용하는 기작은 특정 중합효소에 국한되는 경우가 많으며, 다른 중합효소에 일반화할 수 없습니다. 여기에서는 중합효소 도메인을 비특이적 dsDNA 결합 단백질에 공유 결합시켜 DNA 중합효소의 프로세시티를 상당히 개선하는 단백질 공학 기반 접근법을 보고합니다. Sulfolobus solfataricus의 Sso7d를 DNA 결합 단백질로 사용하여, 가족 A 및 가족 B 중합효소 모두의 프로세시티를 상당히 향상시킬 수 있음을 입증합니다. Sso7d에 점 돌연변이를 도입함으로써, Sso7d의 dsDNA 결합 특성이 향상을 위해 필수적임을 보여줍니다. 우리는 두 가지 새로운 결론을 지지하는 증거를 제시합니다. 첫째, 중합효소에 이종 dsDNA 결합 단백질을 융합하면 촉매 활성과 효소 안정성을 훼손하지 않고도 프로세시티를 증가시킬 수 있습니다. 둘째, 중합효소 프로세시티는 PCR의 효율성을 제한하는 요소로, 융합 효소가 변형되지 않은 효소에 비해 PCR 응용에서 유리한 이점을 보입니다. 이 기술은 핵산 변형 효소의 성능을 폭넓게 개선할 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다.