Um Guia do Usuário para Métodos e Padrões de Clonagem Golden Gate

A demanda contínua por técnicas de clonagem molecular especializadas que atendam a uma ampla gama de aplicações impulsionou o desenvolvimento de muitas estratégias de clonagem diferentes. Um método que ganhou significativa traction é a montagem Golden Gate, que realiza a montagem hierárquica de partes de DNA utilizando enzimas de restrição do Tipo IIS para produzir extremidades adesivas específicas do usuário em fragmentos de DNA cortados. Esta técnica foi modularizada e padronizada, e inclui diferentes subfamílias de métodos, dos quais os mais adotados são os padrões MoClo e Golden Braid. Além disso, conjuntos de ferramentas especializadas adaptadas a aplicações ou organismos específicos também estão disponíveis. No entanto, a quantidade e a variedade de métodos de montagem podem constituir uma barreira para a adoção por novos usuários, e até mesmo cientistas experientes podem achar difícil discernir quais ferramentas são mais adequadas para seus objetivos. Nesta revisão, fornecemos um guia amigável para iniciantes sobre a montagem Golden Gate, comparamos os diferentes padrões disponíveis e detalhamos as características específicas e peculiaridades dos conjuntos de ferramentas comumente usados. Também fornecemos uma atualização sobre o estado da arte da tecnologia Golden Gate, discutindo avanços e desafios recentes para informar usuários existentes e promover práticas padrão.