तटस्थ सिस्टीन प्रोटीज़ ब्लीओमाइसिन हाइड्रोलाइज आवश्यक है डाइमिनेटेड फिलाग्रिन का अमीनो एसिड में टूटना

फिलाग्रिन कर्निफाइड सेल लपेटन का एक घटक है और यह स्वतंत्र अमीनो एसिड का पूर्ववर्ती है जो स्ट्रेटम कॉर्नियम में एक प्राकृतिक मॉइस्चराइजिंग कारक के रूप में कार्य करता है। डाइमिनेशन स्वतंत्र अमीनो एसिड में फिलाग्रिन के अपघटन के लिए महत्वपूर्ण है। इस अध्ययन में, हमने इन विट्रो में डाइमिनेटेड फिलाग्रिन की cleavage के लिए जिम्मेदार एंजाइमों की पहचान करने की कोशिश की। सबसे पहले, हमने न्यूबॉर्न चूहों की एपिडर्मिस के अर्क में साइट्रुलिन एमिनोपेप्टीडेज गतिविधि की जांच की डबल लेयर फ्लोरोसेंट ज़ाइमोग्राफी द्वारा और तटस्थ पीएच पर मजबूत गतिविधि का पता लगाया। साइट्रुलिन छोड़ने की गतिविधि की निगरानी करते हुए, हमने 280 kDa का एक एंजाइम शुद्ध किया, जिसमें 48 kDa की छह समान उपइकाइयां शामिल थीं। प्रतिनिधि ट्राइप्टिक पेप्टाइड्स के NH(2) समाप्ति चूहों के ब्लीओमाइसिन हाइड्रोलाइज (BH) के अनुक्रम के साथ पूर्ण रूप से मेल खाती है। एंजाइम ने बीटा-नैफ्थाइलैमाइड व्युत्पत्तियों से विभिन्न अमीनो एसिड छोड़ दिए सिवाय प्रो के और साइट्रुलिन-बेटा-नैफ्थाइलैमाइड को सबसे प्रभावी ढंग से हाइड्रोलाइज किया। इस प्रकार, डाइमिनेटेड फिलाग्रिन को तोड़ने के लिए एक अन्य प्रोटीज की आवश्यकता होगी। परीक्षण किए गए प्रोटीज़ में, कैलपेन I ने मैट्रिक्स-सहायता प्राप्त लेजर डिसॉर्प्शन/आयनाइजेशन-टाइम ऑफ़ फ़्लाइट द्रव्यमान स्पेक्ट्रम पर डाइमिनेटेड फिलाग्रिन को कई विभिन्न द्रव्यमान वाले पेप्टाइड्स में प्रभावी रूप से अपघटित कर दिया। हमने पुष्टि की कि विभिन्न अमीनो एसिड सहित साइट्रुलिन उन पेप्टाइड्स से BH द्वारा छोड़े गए थे। दूसरी ओर, कैस्पेज 14 ने डाइमिनेटेड फिलाग्रिन को सीमित द्रव्यमान के कुछ पेप्टाइड्स में अपघटित किया। सामान्य मानव त्वचा का इम्युनोहिस्टोकैमिकल विश्लेषण BH और फिलाग्रिन का ग्रेन्युलर परत में सह-स्थानीयकरण प्रकट करता है। एकत्रित रूप से, हमारे परिणाम सुझाव देते हैं कि BH प्राकृतिक मॉइस्चराइजिंग कारकों के संश्लेषण के लिए आवश्यक है और कि कैलपेन I फिलाग्रिन के अपघटन में एक अपस्ट्रीम प्रोटीज के रूप में भूमिका निभाएगा।