抵抗性植物からの抑制因子なしの核酸を効率的に分離するプロトコル

ポリフェノールや多糖類が豊富な最も厳しい植物の葉サンプルからでさえ、抑制因子なしのゲノムDNAを迅速かつ簡単に分離するためのプロトコルが開発されました。DNA抽出液中の多糖類の可溶性を防ぐために、高濃度の塩（1.4 M）が抽出緩衝液に使用されました。ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）の抑制因子であるポリフェノールを除去するためにポリビニルピロリドン（PVP）が使用されました。各種酵素のようなタンパク質はプロテナーゼKによって分解され、分離過程で植物抽出物から遠心分離によって除去され、PCR、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）、ライゲーション、制限酵素処理、シーケンシングを含む下流のアプリケーションで使用するための純粋なDNAとRNAが得られました。このプロトコルにより、汚染と色が除去された高分子量のDNAおよびRNAが抵抗性植物の葉と根から分離されました。ベツリカおよびブドウの根と新芽からの総RNAの平均収量は、285〜364 ng/µlで、A260/A280比は1.9〜2.08でした。このプロトコルで分離されたRNAは、PCR、定量的リアルタイムPCR、準定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、cDNA合成および発現解析に適していることが確認されました。ここで示されているプロトコルは再現性があり、ポリフェノールや多糖類を含む広範な植物種にも使用できます。