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A proteína associada ao CRISPR (repetições palindrômicas agrupadas e regularmente espaçadas) procariótico, Cas9, tem sido amplamente adotada como uma ferramenta para edição, imagem e regulação de genomas eucarióticos. No entanto, nossa compreensão sobre como selecionar RNAs guia únicos (sgRNAs) que mediam uma atividade eficiente da Cas9 é incompleta, pois carecemos de insights sobre como a cromatina impacta o direcionamento da Cas9. Para abordar essa lacuna, analisamos triagens genéticas em larga escala realizadas em linhagens celulares humanas usando Cas9 com atividade nucleasse ou Cas9 sem atividade nucleasse (dCas9). Observamos que sgRNAs altamente ativos para Cas9 e dCas9 foram encontrados quase exclusivamente em regiões de baixa ocupação de nucleossomos. Experimentos in vitro demonstraram que os nucleossomos de fato impedem diretamente a ligação e clivagem da Cas9, enquanto a remodelação da cromatina pode restaurar o acesso da Cas9. Nossos resultados revelam um papel crítico da cromatina eucariótica em ditar a especificidade de direcionamento dessa enzima bacteriana transplantada e fornecem regras para a seleção de locais-alvo da Cas9 distintos e complementares àqueles baseados em propriedades de sequência.
Horlbeck et al. (Qui,) estudaram essa questão.