Sistema de Genética Reversa para o Vírus Coronavírus Aviário da Bronquite Infecciosa

Avanços significativos no estudo da biologia molecular de vírus RNA resultaram da capacidade de gerar e manipular cDNAs genômicos de comprimento total dos genomas virais, com a subsequente síntese de RNA infeccioso para a geração de vírus recombinantes. Os coronavírus possuem os maiores genomas de vírus RNA e, juntamente com a instabilidade genética de algumas sequências de cDNA em Escherichia coli, isso dificultou a geração de um sistema de genética reversa para este grupo de vírus. Neste relatório, descrevemos a montagem de um cDNA de comprimento total a partir do RNA genômico de sentido positivo do coronavírus aviário, vírus da bronquite infecciosa (IBV), um importante patógeno para aves. O cDNA genômico do IBV foi montado imediatamente a jusante de um promotor de polimerase RNA T7 por meio de ligação in vitro e clonado diretamente no genoma do vírus vaccinia. O RNA infeccioso do IBV foi gerado in situ após a transfecção de DNA restrito de vírus vaccinia recombinante em células renais de pintinho primárias previamente infectadas com um vírus recombinante da varíola aviária expressando polimerase RNA T7. O IBV recombinante, contendo duas mutações marcadoras, foi recuperado das células transfetadas. Esses resultados descrevem um sistema de genética reversa para estudar a biologia molecular do IBV e estabelecem um paradigma para gerar vacinas geneticamente definidas para o IBV.