التغيرات الشكلية للنطاق الخارجي المعاد تركيبه من E‐cadherin عند ارتباط الكالسيوم

بروتين التصاق الخلايا E-cadherin/uvomorulin يظهر اتحاداً ذاتياً يعتمد على الكالسيوم. تم دراسة تأثير Ca2+ على الشظية الخارجية من E-cadherin باستخدام البروتين المعاد تركيبه المعبر عنه في نظام التعبير باكولوفايروس. وُجد أن الشظية المعاد تركيبها والشفافة من E-cadherin متشابهة من خلال العديد من المعايير الكيميائية الحيوية (Herrenknecht, K. & Kemler, R. (1993) J. Cell Sci. 17, 147-154). تم ملاحظة انتقال شكلي كبير وقابل للعكس عند استنفاد Ca2+. أصبح من الواضح من خلال التحليل المجهري الإلكتروني أنه حدث تغيير من هيكل يشبه القضيب بطول 22 نانومتر إلى تجميع كروي أكثر من خمسة مجالات فرعية. في وجود Ca2+، كانت أطياف الاستقطاب الدائري تشير بشكل رئيسي إلى هيكل بيتا، لكن لوحظت خصائص إهليلجية أكثر سلبية في غياب Ca2+. تقلصت الفلورية الداخلية للتربتوفان بنسبة 12% عند استنفاد Ca2+. تم استخدام كلا التأثيرين لقياسات الكالسيوم التي أظهرت ارتباط الكالسيوم بمواقع عديدة بقيم متوسطة K(d) تتراوح بين 45-150 ميكرومول. حدث انقسام الشظية البروتينية بواسطة التربسين فقط عند تركيزات منخفضة من Ca2+ ومن اعتماد معدلات الانقسام على الكالسيوم، تم استخراج قيمة K(d) تبلغ 24 ميكرومول. تم تحديد الموقع الرئيسي للانقسام من خلال التسلسل الجزئي ليكون بين موقعين محتملين للارتباط بالكالسيوم في المجال الفرعي الثالث من الطرف N. يتماشى هذا مع النتائج السابقة للشغف الأصلي، حيث لم يترافق البروتين المعاد تركيبه في وجود أو غياب Ca2+. لذلك، نقترح أن الاعتماد الذاتي على الكالسيوم يعتمد على تأثيرات إضافية مرتبطة باصطفاف E-cadherin على سطح الخلية.