Roles esenciales de CD14 y proteína de unión a lipopolisacáridos para la activación del receptor tipo toll (TLR)2 así como TLR4

Aunque los estudios genéticos han revelado un papel crítico del receptor tipo toll (TLR) 4 en la respuesta biológica al lipopolisacárido (LPS), las actividades de TLR4 y TLR2 expresados ectópicamente son controvertidas. Hemos encontrado que, bajo condiciones de transfección apropiadas, tanto TLR2 como TLR4 median la activación de NF-kappaB inducida por LPS en células de riñón embrionario humano 293. Los sistemas de reconstitución que establecimos aquí permiten la caracterización bioquímica directa y la comparación de la activación de cada receptor. TLR4 es aproximadamente 100 veces más sensible al LPS que TLR2. En contraste con la respuesta a preparaciones comerciales de LPS, TLR2 no responde a LPS purificado nuevamente o a lípido A sintético, indicando la necesidad de una molécula(s) adicional(es). Por otro lado, un reactivo neutralizante de lípido A, polimixina B, bloquea la capacidad de la preparación de LPS para estimular ambos receptores, sugiriendo que el lípido A también está involucrado en la activación de TLR2. Los TLR mutantes que presentan una mutación puntual en el dominio citoplásmico son inactivos en la transducción de la señal tras la estimulación, y actúan como mutantes dominantes negativos, inhibiendo específicamente la activación del tipo correspondiente de receptor pero no del otro tipo. Así, los dos receptores son activados de manera independiente por ligandos distinguibles. Sin embargo, las respuestas de ambos TLR a la preparación de LPS son fuertemente dependientes del sérum y CD14 y la proteína de unión a LPS son esenciales para la activación de ambos receptores. Apoyando su significancia funcional, se ha encontrado que ambos receptores se asocian con CD14.