세포외 수정 리보뉴클레오타이드는 최근 강력한 세포 간 신호 분자로 떠오르고 있지만, 복잡한 생체 유체에서의 낮은 농도는 그 기능의 전체를 이해하는 데 있어 진전을 방해하고 있습니다. 주요 병목 현상은 생물학적 유체에서 세포외 수정 뉴클레오타이드를 추출, 정제 및 전농축할 수 있는 샘플 준비 기술의 부족입니다. 여기서는 붕소 복합화, 온도 보조 이온 액체 마이크로 추출(BTAIL-ME) 기술을 개발하여 이 한계를 해결합니다. BTAIL-ME는 리보뉴클레오타이드의 시스-다이올과 붕소 에스터 형성을 활용하고, IL 용매의 현장 생산을 통해 수정된 리보뉴클레오타이드를 신속하고 선택적으로 추출할 수 있도록 합니다. 우리는 8개의 IL 용매의 추출 성능을 합성하고 조사했으며, BTAIL-ME의 온도, 추출 시간 및 IL 농도와 같은 주요 매개변수를 최적화했습니다. 최적화된 BTAIL-ME 방법은 약 27배의 전농축 계수를 나타내는 이양성 이온 액체 1,10-di(3-benzylimidazolium)decane bis(trifluoromethyl)sulfonylimide (C10(BzIM)22+ 2NTf2−)를 이용하여 N7-메틸구아노신(m7G)과 N1-메틸아데노신(m1A)을 전농축했으며, 이는 나노몰 농도의 샘플에 대해 기존의 고형상 마이크로 추출 방법을 사용할 때 이 뉴클레오타이드들의 농축이 없음을 보여줍니다. 무엇보다도, BTAIL-ME의 광범위한 적용 가능성을 위해, LC-MS 장비에 직접 주입하기 위해 IL 상에서 뉴클레오타이드를 회수하는 질량 분석 호환 방법을 개발했습니다. 그 후 BTAIL-ME를 Aplysia californica 신경 조직의 주요 배양에서 방출된 세포외 수정 리보뉴클레오타이드를 조사하는 데 적용하고, 이를 통해 세 가지 메틸화된 양전하를 가진 리보뉴클레오타이드의 하류 LC-MS 검출을 가능하게 했습니다. BTAIL-ME는 LC-MS에 의해 선택된 세포외 수정 리보뉴클레오타이드의 프로파일링을 위한 추출 접근법을 도입하여 생물학적 시스템에서의 기능 이해를 위한 길을 열었습니다.
Floro et al. (수요일,)은 이 질문에 대해 연구했습니다.