人类血管生成因子无内含子基因的克隆与测序

从由人类肝脏poly(A) mRNA制备的cDNA文库中，利用合成寡核苷酸作为杂交探针，分离了编码人类肿瘤源性血管生成因子血管生成素的人类cDNA。最大的cDNA插入片段（697碱基对）包含一个短的5'-非编码序列，后跟一个编码24（或22）个氨基酸的信号肽的序列，369个核苷酸编码123个氨基酸的成熟蛋白，一个终止密码子，一个175个核苷酸的3'-非编码序列，以及一个poly(A)尾。然后，利用cDNA作为探针，从基因组lambda Charon 4A噬菌体文库中分离出编码人类血管生成素的基因。随后确定该基因及相邻的5'和3'调控区域的核苷酸序列（4688碱基对）。发现人类血管生成素基因的编码和3'-非编码区域均无内含子，基因的DNA序列与cDNA序列吻合良好。该基因在5'末端包含一个潜在的TATA框，以及紧邻基因5'和3'末端的两个Alu重复序列。第三个Alu序列也在基因3'末端的Alu序列下游约500个核苷酸的位置被发现。根据基因序列预测的人类血管生成素的氨基酸序列与氨基酸序列分析确定的结果完全一致。它与人类胰腺核糖核酸酶的同源性约为35%，而对核糖核酸酶活性至关重要的氨基酸残基在血管生成素中也得到了保留。这个引人注目的发现被认为具有重要的生理学意义。