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복잡한 게놈에서 고유한 염기서열을 조준하는 맞춤형 DNA 결합 도메인을 생성하는 것은 많은 바이오 기술 응용 분야에 중요합니다. 최근에 설명된 Xanthomonas의 전사 활성화 유사 효과기(TALE)의 DNA 결합 도메인은 연속적으로 배열된 일련의 반복으로 구성되어 있으며, 각 반복은 목표 염기서열의 하나의 뉴클레오타이드에 결합합니다. 우리는 17.5 반복을 포함하는 AvrBs3 TALE을 스캐폴드로 사용하여 새로운 DNA 결합 특성을 가진 TALE 단백질을 조작하는 전략을 제시합니다. 17개의 완전 반복 각각에 대해, 각기 다른 염기 선호도를 가진 4개의 모듈 유형이 생성되었습니다. 이 68개의 반복 모듈 집합을 사용하여 선택한 모듈을 정의된 선형 순서로 조립함으로써 원하는 17개 뉴클레오타이드 DNA 목표 염기서열에 대한 인식 도메인을 구성할 수 있습니다. 조립은 여러 DNA 조각의 원활한 융합을 가능하게 하는 골든 게이트 클로닝 방법을 사용하여 두 개의 연속적인 일회성 클로닝 단계에서 수행됩니다. 이 전략을 적용하여, 우리는 새로운 목표 특성을 가진 디자이너 TALE을 조립하고 그 기능을 in vivo에서 테스트했습니다.
Weber et al. (Thu,)는 이 문제를 연구했습니다.