Fallo de los agonistas de cAMP para activar el CFTR ΔF508 rescatado en monocapas epiteliales de la vía aérea CFBE41o–

El regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quística (CFTR) es un canal de cloro regulado por AMP cíclico. Las mutaciones en el gen CFTR resultan en fibrosis quística (FQ). La mutación más común, deltaF508, resulta en degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD) del CFTR. El CFTR deltaF508 ha sido descrito como una mutación sensible a la temperatura que puede ser rescatada tras un crecimiento a 27 grados C. Para estudiar el procesamiento y la función del CFTR salvaje y el CFTR deltaF508 rescatado en la superficie celular bajo condiciones no polarizadas y polarizadas, desarrollamos líneas celulares estables que expresan CFTR deltaF508 o CFTR salvaje. CFBE41o- es una línea celular epitelial de las vías aéreas humanas capaz de formar monocapas polarizadas de alta resistencia cuando se cultiva en soportes permeables, mientras que las células HeLa normalmente se cultivan bajo condiciones no polarizantes. La inmunoprecipitación, la biotinilación de la superficie celular, la inmunofluorescencia y los ensayos funcionales confirmaron la presencia de CFTR deltaF508 en la superficie celular en ambas líneas celulares después de incubar las células durante 48 h a 27 grados C. Sin embargo, los estimuladores del CFTR salvaje, como la forbolina, los agonistas beta2-adrenérgicos o de receptores de adenosina A2B, no lograron activar el CFTR deltaF508 rescatado en monocapas CFBE41o-. El CFTR deltaF508 rescatado podría ser estimulado con genisteína independientemente del tratamiento previo con agonistas de señalización de cAMP. Curiosamente, el CFTR deltaF508 rescatado en células HeLa podría ser eficientemente estimulado con forbolina o genisteína para promover el transporte de Cl-. Estos resultados indican que el CFTR deltaF508, cuando es rescatado en células epiteliales humanas de las vías aéreas CFBE41o-, es poco receptivo a las vías de señalización conocidas por regular el CFTR salvaje. Además, las diferencias en el rescate y la activación del CFTR deltaF508 en las dos líneas celulares sugieren que las diferencias específicas del tipo celular en el procesamiento del CFTR deltaF508 probablemente complicarán los esfuerzos por identificar potenciadores y/o correctores del defecto deltaF508.