胆固醇酯转运蛋白 (CETP) 基因中与 CETP 质量和高密度脂蛋白胆固醇水平相关的新功能性启动子多态性 CETP/−629

本文描述了位于胆固醇酯转运蛋白 (CETP) 基因启动子 -629 位的一个新多态性 (CETP/-629A/C)。在来自 ECTIM 研究的 536 名对照受试者样本中，与 C 等位基因相比，-629A 等位基因与较低的 CETP 质量 (P<0. 0001) 和较高的高密度脂蛋白胆固醇 (P<0.001) 相关。在 HepG2 细胞中进行转染研究，使用掺入了 777-bp CETP 启动子片段并在 -629 位含有 A 或 C 的荧光素酶表达载体，结果显示含 A 等位基因启动子片段的荧光素酶活性显著降低 (-25%, P<0.05)。通过凝胶迁移实验（gel-shift assay），使用由多态性位点周围 20 bp 启动子序列构成的 2 种探针（A 探针或 C 探针），评估了 HepG2 细胞核提取物中的 DNA-蛋白质相互作用。A 探针和 C 探针分别鉴定出迁移率不同的两种特异性复合物。与过量含有 Sp1 共有结合位点的寡核苷酸竞争表明，Sp 转录因子家族的一种（或多种）蛋白质参与了与 A 探针的复合物形成，但未参与与 C 探针的复合物形成。与特异性抗体孵育表明，Sp1 和 Sp3 与 A 探针发生特异性结合。我们在 -629-Sp1 结合位点中引入突变，以测试其功能并明确转录因子结合的特征。通过凝胶迁移实验证实，没有核蛋白与突变序列结合。HepG2 细胞的瞬时转染显示，突变片段的表达与 A 启动子片段相比显著增加 (25%, P<0.05)。突变片段表现出与 C 启动子相同的活性。这些结果表明，Sp1 和/或 Sp3 抑制 CETP 启动子活性，而结合 C 等位基因的核因子对启动子表达没有影响。