用于猪背膘和背最长肌 real-time RT-PCR 数据归一化的一组新型参考基因的开发及使用 PPARGC1A 进行的评估

背景：使用 real-time RT-PCR 的一个关键环节是在得出任何结论之前必须对表达结果进行归一化。根据对结果准确性的期望要求，可以通过使用一个或多个经过验证的参考基因来完成这一过程。然而，在猪中，关于参考基因表达稳定性的信息非常有限。因此，本研究的目的是开发一组新的参考基因，用于对猪背膘和背最长肌（两者均代表猪胴体中具有重要经济价值的部分）中表达基因的 mRNA 表达数据进行归一化。由于在脂肪代谢和肌纤维类型组成中具有多种功能，过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PPARGC1A）是肉质性状的一个非常受关注的候选基因，也是评估我们开发的用于这两种组织类型 mRNA 表达数据归一化的参考基因组的理想基因。结果：测定了 10 个参考基因的 mRNA 表达稳定性。RPL13A 和 SDHA 的表达显得极不稳定。在对表达最稳定的 3 个参考基因（ACTB、TBP 和 TOP2B）的几何平均值进行归一化后，结果不仅显示背最长肌各样本中的 PPARGC1A mRNA 表达量显著高于背膘（P < 0.05），而且在该 3 个肌肉样本中位于最颅侧的样本中表达量显著更高（P < 0.05）。结论：本研究提供了一组适用于猪背膘和背最长肌 real-time RT-PCR 数据归一化的新参考基因（ACTB、TBP 和 TOP2B）。应用该参考基因组后获得的 PPARGC1A 表达结果，是揭示猪体内 PPARGC1A 表达模式的第一步，并为在保持瘦肉胴体的同时进行改善肉质的可能选择提供了基础。