Isolamento de uma nova classe de fatores de transcrição bZIP que interagem com elementos responsivos ao ABA e de especificação embrionária no promotor do Dc3 usando um sistema de híbrido de levedura modificado

Dc3 é um gene da classe lea da cenoura que é abundantemente expresso durante a embriogênese somática e zigótica. Sua expressão é normalmente específica para o embrião e também pode ser induzida pelo ácido abscísico. Os elementos regulatórios que mediam a expressão específica do embrião do Dc3 residem dentro da região do promotor proximal (-117 a +26), que também é essencial para a expressão induzida por ABA. Neste estudo, foi utilizada uma versão otimizada do sistema de híbrido de levedura para clonar fatores que se ligam à região do promotor do gene Dc3. Vinte e cinco milhões de transformantes de levedura foram triados em um único experimento, e nove clones de cDNA independentes foram isolados de uma biblioteca de girassol que codificam proteínas que se ligam especificamente a elementos cis-regulatórios funcionais no promotor do Dc3. A análise desses clones mostrou que eles derivam de três espécies diferentes de mRNA que codificam duas proteínas básicas de leucina zipper. As regiões básicas dessas proteínas, chamadas de DPBF-1 e 2 (Fator de Ligação ao Promotor Dc3-1 e 2), respectivamente, são quase idênticas entre si e são semelhantes ao fator de ligação ao G-box de plantas GBF-4. Fora da região básica, no entanto, DPBF-1 e 2 divergem significativamente entre si e de outros fatores conhecidos. Ambos os fatores têm atividade transcricional em levedura e se ligam ao DNA na forma de dímeros. Ao contrário de outros fatores bZIP de plantas, DPBF-1 e 2 reconhecem sequências que contêm o núcleo ACACNNG. O clonagem desses fatores demonstra o poder da abordagem de híbrido quando aplicada de forma otimizada.