Preuve expérimentale des activités contractiles des myosines IA et IB d'Acanthamoeba.

La viscosité de faible cisaillement de 5-30 microM de F-actine a été fortement augmentée par l'ajout de 0,1-0,5 microM de myosines IA et IB d'Acanthamoeba non phosphorylées. L'augmentation de la viscosité était à peu près la même dans 2 mM d'ADP que en l'absence de nucléotide libre mais était beaucoup moins dans 2 mM d'ATP. Les myosines monomoléculaires à tête unique d'Acanthamoeba étaient aussi efficaces qu'une concentration molaire équivalente de myosine lourde meromyosine à deux têtes et beaucoup plus efficaces que le sous-fragment-1 de myosine musculaire à tête unique. Ces résultats suggèrent que les myosines IA et IB d'Acanthamoeba peuvent relier les filaments d'actine comme proposé dans l'article accompagnant (Albanesi, J. P., Fujisaki, H. et Korn, E. D. (1985) J. Biol. Chem. 260, 11174-11179) pour expliquer l'augmentation coopérative dépendante de l'actine de l'activité Mg2+-ATPase activée par l'actine en fonction de la concentration de myosine I. Une superprécipitation a eu lieu lorsque la myosine IA ou IB phosphorylée a été mélangée avec de la F-actine. En plus de la phosphorylation de la chaîne lourde de myosine I, la superprécipitation nécessitait Mg2+ et ATP. L'hydrolyse de l'ATP était linéaire pendant le déroulement de la superprécipitation, et les inhibiteurs de l'hydrolyse de l'ATP inhibaient la superprécipitation. Un gel dense et contracté a été formé lorsque la réaction a été réalisée dans une cuvette, et un fil d'actomyosine biréfringent a résulté de la superprécipitation dans une microcapillaire. La vitesse et l'étendue de la superprécipitation dépendaient des concentrations d'actine et de myosine I avec une superprécipitation maximale se produisant à un rapport actine:myosine de 7:1. Ces résultats fournissent de fortes preuves de la capacité des myosines IA et IB d'Acanthamoeba à effectuer des fonctions contractiles et motiles.