Un sistema de polimerasa de ARN/bacteriófago T7/promotor para la expresión exclusiva controlada de genes específicos.

El gen de la polimerasa de ARN del bacteriófago T7 ha sido clonado en el plásmido pBR322 bajo el control inducible del promotor lambda PL. Después de la inducción, la polimerasa de ARN T7 constituye el 20% de la proteína soluble de Escherichia coli, un aumento de 200 veces en comparación con los niveles encontrados en células infectadas por T7. La enzima sobreproducida se ha purificado a homogeneidad. Durante la extracción, la enzima es sensible a una proteólisis específica, una reacción que puede ser evitada mediante una modificación de las condiciones de lisis. La especificidad de la polimerasa de ARN T7 por sus propios promotores, combinada con la capacidad de inhibir selectivamente la polimerasa de ARN del hospedador con rifampicina, permite la expresión exclusiva de genes bajo el control de un promotor de polimerasa de ARN T7. Describimos dicho sistema acoplado y su uso para expresar altos niveles de la proteína del gen 5 del fago T7, una subunidad de la polimerasa de ARN T7.