Caracterización del Dominio Intracelular del Activador del Receptor de NF-κB (RANK)

Varios miembros de la superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNF) interactúan directamente con moléculas de señalización de la familia del factor asociado al receptor de TNF (TRAF) para activar el factor nuclear kappaB (NF-kappaB) y la vía de la quinasa N-terminal de c-Jun (JNK). El activador del receptor de NF-kappaB (RANK), un miembro de la familia de receptores de TNF recientemente descrito, y su ligando, RANKL, promueven la supervivencia de las células dendríticas y la diferenciación de los osteoclastos. RANK contiene 383 aminoácidos en su dominio intracelular (residuos 234-616), que contienen tres dominios putativos de unión a TRAF (denominados I, II y III). En este estudio, nos propusimos identificar la región de RANK necesaria para la interacción con moléculas de TRAF y para la estimulación de la actividad de NF-kappaB y JNK. Construimos RANK marcado con epítopos (F-RANK616) y tres truncamientos C-terminales, F-RANK330, F-RANK427, y F-RANK530, que carecen de 85, 188 y 285 aminoácidos, respectivamente. A partir de este análisis de eliminación, determinamos que TRAF2, TRAF5 y TRAF6 interactúan con RANK en su cola C-terminal de 85 aminoácidos; la afinidad de unión parecía estar en el orden de TRAF2 > TRAF5 > TRAF6. Además, la sobreexpresión de RANK estimuló la activación de JNK y NF-kappaB. Cuando se eliminó la cola C-terminal, que es necesaria para la unión a TRAF, el receptor RANK truncado aún fue capaz de estimular la actividad de JNK, pero no la de NF-kappaB, sugiriendo que la interacción con TRAFs es necesaria para la activación de NF-kappaB, pero no para la activación de la vía JNK.