Efeito da força próton-motriz nas estequiometrias relativas dos bombeamentos de prótons mitocondriais

A taxa de fosforilação do ADP por mitocôndrias isoladas respirando em succinato foi determinada pela adição de ATP, ADP ou ADP mais malonato. Medimos as taxas de fosforilação e respiração e a força próton-motriz sob cada uma dessas condições. Medimos o consumo de oxigênio necessário para impulsionar o vazamento de prótons na força próton-motriz alcançada sob cada condição e subtraímos isso da taxa de respiração durante a fosforilação para determinar o consumo de oxigênio impulsionando a fosforilação. Ao dividir a taxa de fosforilação pela taxa de respiração que impulsiona a fosforilação, calculamos a relação mecanística P/O (número de moléculas de ADP fosforiladas por átomo de oxigênio reduzido). Essa relação foi a mesma em valores altos, intermediários e baixos de força próton-motriz, indicando que as estequiometrias relativas das bombas que produzem e consomem força próton-motriz mitocondriais (ou seja, H+/O:H+/ATP) são independentes da força próton-motriz. Isso enfraquece significativamente o argumento para uma diminuição na estequiometria, ou 'escorregamento', nas bombas de prótons mitocondriais em alta força próton-motriz.