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효모 Candida boidinii에서 NAD 의존성 포르메이트 탈수소효소 (FDH)의 유전자는 유전체 DNA를 템플릿으로 하여 PCR에 의해 클론화되었습니다. 대장균에서의 유전자 발현은 약 20%의 용해성 세포 단백질과 함께 기능적인 FDH를 생성하였습니다. 티올 결합 비활성화 과정의 가설을 확증하기 위해, 효소의 기본 구조에 있는 두 개의 시스테인 잔기를 Pseudomonas sp. 101의 3D 구조 및 관련 탈수소효소를 기반으로 하는 동종 모델을 사용하여 시점 지향 돌연변이로 교환하였습니다. wt 효소와 비교했을 때, 대부분의 돌연변이는 Cu(II) 이온이 있는 산화 스트레스에 대해 상당히 더 안정적이었으며, 효소 반응의 온도 최적과 동역학 상수는 돌연변이에 의해显著하게 변경되지 않았습니다. Tm 값을 결정한 결과, 50도 C 이상의 온도에서의 안정성은 본래 및 재조합 wt 효소에 대해 최적(Tm 57도 C)인 반면, 돌연변이 효소의 Tm 값은 44-52도 C 범위에서 변동합니다. 트리메틸 피루베이트를 Ltert 류신으로의 바이오 변환에서 NADH의 재생을 위한 효소 적용에 대한 초기 테스트에서 가장 좋은 결과는 FDHC23S 및 FDHC23S/C262A 두 개의 돌연변이와 함께 얻어졌으며, 이들은 wt 효소보다 상당히 더 안정적입니다.
Slusarczyk et al. (수), 이 질문을 연구하였습니다.