Las mutaciones de Flt3 en pacientes con leucemia mieloide aguda inducen la transformación de células 32D mediada por las vías de Ras y STAT5

Las mutaciones somáticas del receptor tirosina quinasa Flt3, que consisten en duplicaciones en tándem internas (ITD), ocurren en el 20% de los pacientes con leucemia mieloide aguda. Están asociadas con un mal pronóstico de la enfermedad. En este estudio, caracterizamos el potencial oncogénico y las propiedades de señalización de las mutaciones de Flt3. Construimos moléculas quiméricas que consistían en el esqueleto de Flt3 murino y un fragmento humano de Flt3 de 510 pares de bases, que contenía cuatro mutantes diferentes de ITD o la secuencia codificante de tipo salvaje. Las isoformas de Flt3 que contenían mutaciones de ITD (Flt3-ITD) inducían crecimiento independiente de factores y resistencia a la apoptosis inducida por radiación en células 32D. Las células que contenían Flt3-ITD, pero no aquellas que contenían Flt3 de tipo salvaje (Flt3-WT), formaron colonias en metilcelulosa. La inyección de 32D/Flt3-ITD indujo un rápido desarrollo de una enfermedad tipo leucemia en ratones singénios. Las mutaciones de Flt3-ITD mostraron autofosforilación constitutiva de la forma inmadura del receptor Flt3. El análisis de las vías de transducción de señales involucradas reveló que Flt3-ITD solo activaba ligeramente las proteínas quinasas MAP Erk1 y 2 y la proteína quinasa B (Akt) en ausencia de ligando y mantenía la activación inducida por ligando de estas enzimas. Sin embargo, Flt3-ITD conducía a una activación fuerte e independiente de factores de STAT5. La importancia relativa de las vías de STAT5 y Ras para la formación de colonias inducida por ITD se evaluó mediante la transfección de formas dominantes negativas (dn) de estas proteínas: la transfección de dnSTAT5 inhibió la formación de colonias en un 50%. A pesar de su débil activación constitutiva por Flt3-ITD, dnRas también inhibió fuertemente la formación de colonias mediada por Flt3-ITD. En conjunto, las mutaciones de Flt3-ITD inducen crecimiento y leucemogénesis independientes de factores en células 32D que son mediadas por las vías de Ras y STAT5. (Blood. 2000;96:3907-3914)