Análise da expressão gênica em neurônios vivos únicos.

Apresentamos aqui um método para caracterizar amplamente células únicas em nível molecular, além das classificações morfológicas e de neurotransmissor/receptor mais comuns. O RNA de células únicas definidas é amplificado por microinjeção de primers, nucleotídeos e enzimas em células dissociadas agudamente de uma região definida do cérebro de rato. O processamento adicional resulta em RNA antissorvo amplificado. Uma segunda rodada de amplificação resulta em mais de 10(6) vezes a amplificação do material inicial, o que é adequado para análise -- por exemplo, uso como probe, confecção de bibliotecas de cDNA, etc. Demonstramos este método construindo perfis de expressão de células vivas únicas do hipocampo de rato. Esse perfil sugere que células que aparentam ser morfologicamente semelhantes podem mostrar diferenças marcantes em padrões de expressão. Além disso, caracterizamos vários mRNAs de uma única célula, alguns dos quais eram anteriormente não descritos, talvez devido à "raridade" quando média sobre muitos tipos celulares. A análise eletrofisiológica acoplada com biologia molecular dentro da mesma célula facilitará uma melhor compreensão de como mudanças em nível molecular se manifestam em propriedades funcionais. Esta abordagem deve ser aplicável a uma ampla variedade de estudos, incluindo desenvolvimento, modelos mutantes, envelhecimento e doenças neurodegenerativas.