正常なヒト細胞への形質転換DNAの統合中の再結合イベント

正常なヒト細胞のゲノムに形質転換DNAがランダムに統合される再結合のメカニズムは、プラスミド-細胞DNA接合部の分析によって調査されました。サルウイルス40配列を含むプラスミドで形質転換した後、一次ヒト線維芽細胞の形態的変化によって統合されたプラスミド配列を含む細胞クローンが選択されました。これらの細胞クローンからの統合部位を含むクローンDNA断片のプラスミド-細胞DNA接合部の塩基配列分析が行われました。その後、一次線維芽細胞からのヒト細胞DNAを用いてポリメラーゼ連鎖反応が行われ、プラスミド統合前の同じ部位からの細胞DNAを選択しました。プラスミド-細胞DNA接合部の配列を元のプラスミドおよび細胞DNAのそれと比較した結果、短い配列の類似性と追加のヌクレオチドが示され、非相同再結合の典型的な特徴が確認されました。プラスミド統合部位における細胞DNAの短い欠失の証拠は、統合が自然発生的またはガンマ線誘発の鎖切断修復に使われるメカニズムに似たものであることを示唆しています。プラスミド統合は主要な再配置がなく非反復的な細胞DNA内で発生しましたが、統合後に統合部位の細胞DNAに再配置が発生したクローンの1つもありました。