Construction et isolation d'un rétrovirus transmissible contenant le gène src du virus du sarcome murin de Harvey et le gène de la thymidine kinase du virus de l'herpès simplex de type 1

Nous avons construit des recombinants lambda contenant le génome du virus du sarcome murin de Harvey et le gène de la thymidine kinase (tk) du virus de l'herpès simplex de type 1 reliés entre eux. Le gène tk était situé en position en aval à la fois de la répétition terminale longue et du gène src du virus du sarcome murin de Harvey. Les ADN des recombinants lambda ont été utilisés pour transfecter des fibroblastes murins NIH3T3 afin d'obtenir des foyers de cellules transformées induites par l'ADN du virus du sarcome murin de Harvey. Les foyers transformés ont été superinfectés avec un rétrovirus indépendant d'aide, et de nouveaux rétrovirus individuels ont été isolés à partir des foyers superinfectés. Les nouveaux virus pouvaient induire la formation de foyers sur des cellules NIH3T3 et pouvaient convertir des cellules NIH3T3(TK-) en cellules TK+ en transportant le gène tk du virus de l'herpès simplex de type 1 dans les cellules TK-. À partir des cellules infectées par le virus, nous avons isolé des foyers non producteurs sur les cellules NIH3T3 et des transformants TK+ sur les cellules NIH3T3(TK-) contenant un tel nouveau génome viral codant pour les propriétés duales. La nouvelle séquence rétrovirale dans les cellules non productrices pouvait être récupérée dans des particules virales à des titres élevés par superinfection avec un rétrovirus indépendant d'aide. Une analyse d'hybridation a indiqué que le virus recombinant contenait à la fois la séquence src du virus du sarcome murin de Harvey et la séquence du gène tk dans une seule espèce d'ARN d'environ 4,9 kilobases de long. Nous avons conclu que les rétrovirus peuvent être utilisés comme de véritables vecteurs pour des gènes autres que les gènes qui conduisent à l'oncogenèse.