hnRNP A1 et hnRNP F modulent l'épissage alternatif de l'exon 11 du gène du récepteur de l'insuline

L'exon 11 du gène du récepteur de l'insuline (INSR) est épissé de manière alternative d'une façon spécifique au développement et aux tissus. Des mutations de scan de liaison dans un amplificateur riche en GA à 5' dans l'intron 10 ont identifié des séquences AGGGA qui sont importantes pour la fonction de l'amplificateur. En utilisant la purification par affinité RNA et la spectrométrie de masse, nous avons identifié hnRNP F et hnRNP A1 se liant à ces sites AGGGA et également à des motifs similaires à l'extrémité 3' de l'intron. Les hnRNP ont des effets fonctionnels opposés, hnRNP F favorisant l'inclusion de l'exon 11 et hnRNP A1 l'inhibant, et la suppression des éléments riches en GA élimine les deux effets. Nous avons également observé une liaison spécifique de hnRNP A1 au site d'épissage 5' de l'intron 11. La protéine SR SRSF1 (SF2/ASF) a co-purifié sur l'amplificateur riche en GA et, intéressant, elle concurrence également hnRNP A1 pour la liaison au site d'épissage. Une mutation ponctuelle -3U→C diminue la liaison de hnRNP A1, augmente la liaison de SRSF1 et rend l'exon constitutif. Enfin, nos données pointent vers une interaction fonctionnelle entre hnRNP F et SRSF1, dans le cadre d'un mutant qui élimine la liaison de SRSF1 à l'exon 11, ou d'un knockdown de SRSF1, qui empêche l'effet stimulant de l'expression excessive de hnRNP F.