استنساخ الجينوم الجزيئي لـ cDNA لــ CENP-B، وهي الأنتيجين الذاتي الرئيسي لكرة المركز البشرية

لقد قمنا بعزل مجموعة من استنساخات cDNA المترابطة لما يقرب من 95% من mRNA الذي يشفر CENP-B، الأنتيجين الذاتي لكرة المركز البشرية الذي يتعرف عليه المرضى الذين لديهم أجسام مضادة ضد كرة المركز. تسجل التسلسلات المستنسخة بولي ببتيد بكتلة جزيئية ظاهرة مناسبة لــ CENP-B. يشارك هذا البولي ببتيد وCENP-B ثلاثة ببتيدات غير متداخلة. الأولين معرفان عن طريق أجسام أحادية النسيلة التي تم تحفيزها من خلال حقن بروتين الاندماج المستنسخ. الببتيد 1 يتناسب مع موقع مستضد رئيسي تم التعرف عليه بواسطة الجسم المضاد للأنتيجين الذاتي المستخدم للحصول على العينة الأصلية. الببتيد 2 هو ببتيد جديد لا تعترف به الأجسام المضادة الذاتية. وقد تم إثبات أن هذه الببتيدات متميزة من خلال تجارب الربط التنافسية ومن خلال وجودها أو غيابها على أجزاء فرعية مختلفة من بروتين الاندماج. الببتيد المستقل الثالث، الذي تم التعرف عليه بواسطة مجموعة فرعية من مصل المرضى الإيجابيين لأجسام مضادة ضد كرة المركز، يقع في منطقة قريبة بشكل كبير من الطرف الأميني لبروتين الاندماج. تشير تحليلات بلوت الحمض النووي والحمض النووي الريبي إلى أن CENP-B غير مرتبط بـ CENP-C، وهو مستضد لكرة المركز بكتلة 140 كيلودالتون تم التعرف عليه أيضًا بواسطة هذه الأجسام المضادة. CENP-B هو نتاج RNA mRNA بحجم 2.9 كيلوباز، والذي يشفره موضع جيني واحد. هذا الحمض النووي الريبي قصير للغاية بحيث لا يمكنه تشفير بولي ببتيد بحجم CENP-C. يحتوي الطرف الكربوكسي لـ CENP-B على مجالين طويلين يتكونان بالكامل تقريبًا من بقايا حمض الغلوتاميك وحمض الأسبارتيك. قد تكون هذه المجالات مسؤولة عن الهجرة الشاذة لـ CENP-B على جيل SDS-Polyacrylamide، حيث أن الكتلة الجزيئية الحقيقية لـ CENP-B هي حوالي 65 كيلودالتون، أي أقل بمقدار 15 كيلودالتون من الكتلة الجزيئية الظاهرة المستمدة من استخدام الإلكترودين. وبشكل غير متوقع، يكشف تحليل المناعة الفلورية باستخدام أجسام مضادة محددة لـ CENP-B أن مستويات المستضد تختلف بشكل كبير بين الكروموسومات.