Um potente potenciador muito a montante no gene colágeno pro alfa 2(I) do camundongo regula a expressão de genes repórteres em camundongos transgênicos.

Identificamos três locais hipersensíveis à DNase I na cromatina entre 15 e 17 kb a montante do gene colágeno pro alfa 2 (I) do camundongo. Esses locais foram detectados em células que produzem colágeno tipo I, mas não em células que não expressam esses genes. Uma construção contendo as sequências de -17 kb a +54 pb do gene colágeno pro alfa 2 (I) do camundongo, clonada a montante de either a beta-galactosidase de Escherichia coli ou do gene repórter luciferase de vaga-lume, mostrou forte atividade de potenciador em camundongos transgênicos quando comparados com os níveis observados anteriormente em animais portadores de fragmentos de promotor mais curtos. Níveis de expressão especialmente altos do gene repórter foram observados na derme, fáscia e nas camadas fibrosas de muitos órgãos internos. Altos níveis de expressão também puderam ser detectados em algumas células osteoblásticas. Quando vários fragmentos das sequências flanqueadoras 5' foram clonados a montante do promotor proximal do colágeno pro alfa 2(I) de 350 pb ligado ao gene lacZ, os elementos cis-atuantes responsáveis pela melhora foram localizados na região entre -13,5 e -19,5 kb, a mesma região que contém os três locais hipersensíveis à DNase I. Além disso, o segmento de DNA de -13,5 a -19,5 kb também foi capaz de dirigir a expressão específica da célula de um promotor de colágeno pro alfa 1(I) de 220 pb, que é silencioso em camundongos transgênicos. Portanto, nossos dados sugerem que um elemento potenciador a montante desempenha um papel na regulação de altos níveis de expressão do gene colágeno pro alfa 2(I) do camundongo.