Análisis Funcional de Quinasa y Factores de Transcripción en Saccharomyces cerevisiae Usando una Biblioteca de Sobrerexpresión Integrada

Resumen Las quinasas y los factores de transcripción (FTs) son moduladores clave de importantes vías de señalización y sus actividades son fundamentales para el correcto funcionamiento de muchos procesos celulares básicos como la división celular, la diferenciación y el desarrollo. Los cambios en la dosis de quinasas y FTs a menudo están asociados con enfermedades, sin embargo, no se ha realizado una evaluación sistemática de los fenotipos celulares causados por la perturbación combinada de quinasas y FTs. Utilizamos un enfoque de genética inversa para estudiar las consecuencias fenotípicas de la sobrerexpresión (OE) de quinasas y FTs en la levadura de gemación, Saccharomyces cerevisiae. Construimos una colección de cepas que expresan alelos inducibles integrados de manera estable de quinasas y FTs y utilizamos una variedad de ensayos para caracterizar los fenotipos causados por la OE de FTs y quinasas. Usamos el método de Array Genético Sintético (SGA) para examinar interacciones genéticas dependientes de la dosis (GIs) entre 239 alelos de FT de ganancia de función (OE) y seis alelos de pérdida de función (LOF) y siete alelos de quinasas OE, los primeros identificando interacciones letales por dosis sintética (SDL) y los últimos probando una GI que llamamos Letalidad por Doble Dosis (DDL). Identificamos y confirmamos 94 GIs entre 65 alelos OE de FTs y 9 alelos de quinasas. Experimentos de seguimiento validaron relaciones regulatorias entre pares que interactúan genéticamente (Cdc28–Stb1 y Pho85–Pdr1), sugiriendo que los estudios de GI que involucran alelos OE de proteínas regulatorias serán una rica fuente de nueva información funcional.