Mejora de la sensibilidad a proteínas para la espectrometría de masas por imagenología MALDI después de un tratamiento químico de secciones de tejido

La espectrometría de masas por imagenología MALDI (IMS) se ha convertido en una herramienta valiosa para la investigación del contenido y distribución de especies moleculares en muestras de tejido. Se han realizado numerosas mejoras metodológicas para optimizar la preparación de secciones de tejido y los protocolos de deposición de matriz, así como la adquisición y procesamiento de datos de MS. En particular, para análisis proteómicos, el lavado de las secciones de tejido antes de la deposición de la matriz ha demostrado ser útil para mejorar las cualidades espectrales al aumentar los rendimientos de iones y el número de señales observadas. Aquí exploramos sistemáticamente los efectos de varias combinaciones de solventes para el lavado de secciones de tejido. Para minimizar la variabilidad experimental, todas las mediciones se realizaron en secciones seriales cortadas de un solo bloque de tejido hepático de ratón. Varios otros pasos clave del proceso, como la deposición de matriz y la adquisición y procesamiento de datos de MS, también se han automatizado o estandarizado. Para evaluar la eficacia, después de cada procedimiento de lavado se contaron la corriente total de iones y el número de picos de los perfiles de proteínas resultantes. Estos resultados se correlacionaron con mediciones en tejido obtenidas para lípidos. Usando enfoques similares, también se probaron varios procedimientos de lavado seleccionados por su capacidad para extender la vida útil y revivir secciones de tejido previamente cortadas. También se estudiaron los efectos de estos lavados en la deposición automática de matriz y el comportamiento de cristalización, así como su capacidad para preservar la histología del tejido. Finalmente, en un estudio completo de IMS, estos procedimientos de lavado se probaron en una biopsia de carcinoma de células renales humanas.