Key points are not available for this paper at this time.
A forma citosólica de NADP+:isocitrato desidrogenase, uma fonte primária do NADPH necessário para a síntese de ácidos graxos de novo na glândula mamária bovina em lactação, foi estudada para determinar possíveis mecanismos de regulação por metabolitos. A cinética de fluxo parado mostrou um tempo de atraso distinto, seguido pela obtenção de uma velocidade final aparentemente linear. Análises de regressão não linear direta das curvas de progresso da reação permitiram o cálculo da constante de velocidade (kappa) para a transição da enzima de uma forma inativa para uma forma ativa; essa transição é melhor catalisada por seu complexo metal-substrato. A pré-incubação com metal-substrato ou metal-citrato quase aboliu o atraso ao aumentar kappa em 10 vezes. Em experimentos em estado estacionário, análises de velocidade versus complexo metal-citrato como uma isotermas de ligação, seguindo as suposições da teoria do vínculo termodinâmico de Wyman, mostraram que a ligação do complexo metal-citrato poderia tanto ativar quanto inibir a enzima. Esta análise sugeriu: (a) ativação por ligação a sítios com uma constante de dissociação média de 0,25 mM; (b) inibição por ligação a sítios com uma constante de dissociação média de 3,83 mM; e (c) modulação (reativação) por ligação a sítios com uma constante de dissociação média de 1,54 mM. As faixas de concentração observadas para essas transições são compatíveis com condições fisiológicas, sugerindo que complexos de metal-citrato e metal-isocitrato servem para modular a atividade de NADP+:isocitrato desidrogenase.
Farrell et al. (Mon,) estudaram essa questão.