Deux phosphohydrolases de triphosphate de nucléoside dépendantes des acides nucléiques du virus Vaccinia

Résumé Deux phosphohydrolases de triphosphate de nucléoside dépendantes des acides nucléiques ont été trouvées dans les noyaux du virus Vaccinia. Les deux enzymes hydrolysent l'ATP en ADP et Pi en présence d'acide nucléique. Les enzymes ont été solubilisées à partir de noyaux viraux purifiés par traitement avec un agent réducteur de thiols, du sel et du désoxycholate de sodium dans un tampon Tris à pH alcalin. Des extraits viraux sans ADN ont été préparés par adsorption de l'ADN viral sur des colonnes de DEAE-cellulose en présence de sel élevé, et les deux enzymes ont été purifiées par chromatographie ADN-cellulose. La phosphohydrolase I a été purifiée de 300 à 400 fois avec des rendements de 80 à 90 % et est d'environ 95 % pure. Un poids moléculaire d'environ 61 000 a été calculé pour l'enzyme native en utilisant la chromatographie sur gel de Sephadex et la centrifugation sur gradient de saccharose. Une valeur de poids moléculaire de 68 000 a été obtenue dans des conditions dénaturantes de l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec dodecylsulfate de sodium, indiquant que la phosphohydrolase I est une enzyme monomère. La plus petite quantité de phosphohydrolase II a empêché des déterminations précises de l'activité spécifique ou de la pureté. Le poids moléculaire de l'enzyme native a été estimé à 68 000 et elle peut également consister en un seul polypeptide. Les acides nucléiques étaient nécessaires pour la phosphohydrolase I et II pour l'hydrolyse de l'ATP, et des activités optimales ont été obtenues à pH neutre en présence de cations divalents. L'hydrolyse de l'ATP a entraîné la production de quantités stoechiométriques d'ADP et Pi. Les valeurs de Km des phosphohydrolases I et II étaient respectivement de 1,4 x 10-4 m et 6,4 x 10-4 m.