Fosforilação de um heptadecapeptídeo sintético pela quinase de cadeia leve de miosina de músculo liso.

Um heptadecapeptídeo sintético correspondente a parte dos 17 resíduos NH2-terminais da cadeia leve de miosina do moela de frango (Mr = 20.000), Ser-Ser-Lys-Thr-Thr-Lys-Arg-Pro-Gln-Arg-Ala-Thr-Ser-(P)-Asn-Val-Phe-Ser-NH2, foi prontamente fosforilado pela quinase de cadeia leve de miosina isolada do mesmo tecido. O peptídeo sintético foi fosforilado estequiometricamente na serina 13, o mesmo resíduo fosforilado na proteína mãe. O Km aparente e o Vmax para a fosforilação do peptídeo foi de 90 microM e 1,3 mumol min-1 mg-1 em comparação com 10 microM e 22 mumol min-1 mg-1, respectivamente, para a cadeia leve de miosina. O heptadecapeptídeo sintético agiu como um inibidor competitivo para a fosforilação da cadeia leve de miosina com Ki aproximadamente 600 microM. A acetilação do grupo alfa-amino do heptadecapeptídeo da serina 1 teve pouco efeito sobre o Vmax (0,8 mumol min-1 mg-1) e aumentou o Km aparente em 2 vezes. A quinase de cadeia leve de miosina de músculo liso não fosforilou o análogo do heptadecapeptídeo sintético correspondente à cadeia leve de miosina do músculo esquelético (Mr = 18.500), nem fosforilou substratos peptídicos sintéticos específicos para a quinase de proteína dependente de cAMP ou quinase b fosforilase. Essas descobertas apoiam a ideia de que a quinase de cadeia leve de miosina tem requisitos específicos de substrato proteico e que alguns deles derivam da região da estrutura primária ao redor do local de fosforilação em seu substrato nativo.