Clonación, expresión y caracterización de una proteína sintasa de óxido nítrico de Deinococcus radiodurans

Clonamos, expresamos y caracterizamos una hemeproteína de Deinococcus radiodurans (sintasa de NO de D. radiodurans, deiNOS) cuya secuencia es 34% idéntica al dominio oxigenasa de las sintasas de NO de mamíferos (NOSoxys). deiNOS era dimérica, unía el sustrato Arg y el cofactor tetrahidrobiopterina, y tenía un ambiente heme normal, a pesar de sus estructuras N-terminales faltantes que en NOSoxy unen Zn(2+) y tetrahidrobiopterina y ayudan a formar un dímero activo. El heme de deiNOS aceptó electrones de una reductasa de NOS de mamíferos y generó NO a tasas que cumplieron o superaron a NOSoxy. La actividad requirió tetrahidrobiopterina unida o tetrahidrofolato y estaba vinculada a la formación y desaparición de un intermediario catalítico típico heme-dioxi. Así, las proteínas tipo NOS bacterianas son sorprendentemente similares a las NOS de mamíferos y amplían nuestra perspectiva de la bioquímica y función del NO.