인산글리콜레이트 인산가수분해효소의 메커니즘

인산글리콜레이트의 효소성 가수분해는 H218O에서의 반응과 질량 분석을 통한 반응 생성물의 트리메틸실릴 유도체 분석에 의해 O-P 결합 파괴를 통해 진행됩니다. 인산, 수산기 또는 카복실기의 교환은 발생하지 않았습니다. 최종 생성물 억제는 알코올 생성물인 글리콜레이트와 인산이 순서대로 방출되는 것과 일치했습니다. 데이터 분석 결과 인산-효소 복합체가 매우 빠르게 해리된다는 것이 나타났으며, 이는 대체 인산모노에스터 기질을 사용하여 확인되었습니다. 이러한 대체 기질에 대한 최대 속도는 해당 알코올 생성물의 pKa에 비례하는 것으로 나타났으며, 이는 반응의 속도 제한 단계가 다리 산소의 프로톤화임을 나타냅니다. 기질 유사체의 사용은 또한 결합을 위한 정확한 입체적 요구사항을 갖춘 효소적 특이성 잔기가 필요하다는 것을 보여주었고, 이로 인해 큰 알킬 그룹이 배제되었습니다. 인산글리콜레이트 인산가수분해효소는 광범위한 수용체에 대한 전인산화 작용을 촉진했으며, 다이이소프로필 플루오로인산염에 의해 활성 부위에서 억제되었습니다. 데이터는 반응 순서가 인산 효소 중간체를 통해 진행된다는 것을 시사합니다. N-에틸말레이미드가 효소를 서서히 비활성화시켰으며, P-글리콜레이트에 의해 비율이 크게 증가했지만 마그네슘이나 인산 이온에 의해 증가는 없었습니다. 데이터는 전이 상태 복합체와 인산효소 형성을 유도하기 위해 구성 변화가 필요하다는 것을 시사합니다. 이는 인산 수용체의 특이성을 설명할 수 있으며, 효소 매개 H2O-인산 산소 교환을 관찰하지 못하는 것과 일치합니다.