Desenvolvimento de um método para a preparação de culturas primárias de células epiteliais intestinais de ratos

Descrevemos um método reprodutível para cultivar epitélio do intestino delgado (derivado do intestino de ratos lactentes) em culturas de curto prazo (primárias). As condições ótimas de cultura foram determinadas por ensaios quantitativos de proliferação (ou seja, mudanças na cellularidade e na síntese de DNA). A isolação do epitélio e, significativamente, a preservação de sua integridade tridimensional foram alcançadas usando uma técnica de digestão com colagenase/dispase. A purificação do epitélio também foi facilitada pelo uso de um método simples de sedimentação diferencial. Os resultados apresentados abaixo apoiam a ideia de que a proliferação do epitélio intestinal normal ex vivo depende inicialmente da manutenção da integridade estrutural deste tecido e de fatores produzidos por células mesenquimatosas heterólogas. A proliferação in vitro também foi criticamente dependente da qualidade do meio e dos constituintes utilizados. As culturas atingiram confluência em 10-14 dias e consistiram em colônias epiteliais juntamente com variações na quantidade de células semelhantes às musculares lisas. As culturas foram mantidas por períodos de até um mês, mas o potencial de crescimento a longo prazo por subcultura não foi examinado. Estratégias para reduzir a proliferação dessas células não epiteliais também são descritas.