14-3-3ζ 两亲性凹槽疏水表面的突变破坏其与 Raf-1 激酶的相互作用

14-3-3 蛋白可与多种参与信号转导通路的调控分子结合，例如 Raf-1、Cbl 和 c-Bcr。14-3-3zeta 的晶体结构显示出一个保守的两亲性凹槽，该凹槽可能介导 14-3-3 与多种配体的结合。与此一致的是，凹槽带电表面上的突变（Lys-49、Arg-56 和 Arg-60）降低了 14-3-3zeta 与所测试配体的结合（Zhang, L., Wang, H., Liu, D., Liddington, R., and Fu, H. (1997) J. Biol. Chem. 272, 13717-13724）。在此我们报道，改变凹槽疏水特性的突变（V176D、L216D、L220D 和 L227D）破坏了 14-3-3zeta 与 Raf-1 激酶的相互作用。根据其形成二聚体的能力、部分蛋白水解谱以及圆二色性分析判断，14-3-3zeta 突变体与 Raf-1 结合力的降低显然不是由于突变体整体结构的改变所致。这些疏水性残基似乎是 14-3-3zeta 与处于不同激活状态的 Raf-1 结合所必需的，因为 V176D、L216D、L220D 和 L227D 突变降低了 14-3-3zeta 与来自 phorbol 12-myristate 13-acetate 刺激和未刺激的 Jurkat T 细胞的 Raf-1 之间的相互作用。这些相同的突变还破坏了 14-3-3zeta 与其他调控分子（如 Cbl 和 c-Bcr）的结合，表明两亲性凹槽的疏水表面代表了多种 14-3-3 相关蛋白所共有的结合位点的一部分。疏水性残基 Val-176、Leu-216、Leu-220 和 Leu-227 在已知 14-3-3 家族成员中的保守性表明它们在配体结合中具有普遍重要性。