cDNA क्लोनिंग, अभिव्यक्ति, और PI31, प्रोटीज़ोम का प्रोलिन-समृद्ध अवरोधक का कार्यात्मक विशेषण

PI31 की प्राथमिक संरचना, जो 20 S प्रोटीज़ोम का एक प्रोटीन अवरोधक है, cDNA क्लोनिंग और अनुक्रमण द्वारा स्थापित की गई। मानव प्रोटीन का अनुमानित आणविक भार 29,792 है, जो कि शुद्ध किये गए गौ रुद्र के लिए SDS-पॉलीएक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा अनुमानित 31,000 के साथ शानदार मेल खाता है, और वर्तमान डेटा बेस में किसी अन्य प्रोटीन के समान नहीं है। PI31 एक प्रोलिन-समृद्ध प्रोटीन है, विशेष रूप से इसके कार्बोक्सिल-टर्मिनल आधे भाग में जहां 26% अमीनो एसिड प्रोलिन हैं। वाइल्ड-टाइप PI31 और विभिन्न ट्रंकटेशन म्यूटेंट Escherichia coli में व्यक्त किए गए और समरूपता के लिए शुद्ध किए गए। संयोजक वाइल्ड-टाइप PI31 ने बकरी के लाल रक्त कोशिकाओं से शुद्ध किए गए PI31 की समान संरचनात्मक और कार्यात्मक गुण प्रदर्शित किए और 20 S प्रोटीज़ोम द्वारा प्रोटीन और पेप्टाइड उपस्रोतों के हाइड्रोलाइसिस को अवरुद्ध किया। ट्रंकटेशन म्यूटेंट का विश्लेषण दर्शाता है कि प्रोटीज़ोम अवरोध PI31 के कार्बोक्सिल-टर्मिनल प्रोलिन-समृद्ध डोमेन द्वारा प्रदान किया गया था, जिसकी एक विस्तारित द्वितीयक संरचना प्रतीत होती है। PI31 द्वारा 20 S प्रोटीज़ोम का अवरोध, एक प्रोटीज़ोम-PI31 जटिल के निर्माण में शामिल था। 20 S प्रोटीज़ोम के प्रत्यक्ष अवरोध के अलावा, PI31 ने PA700 और PA28 नामक दो प्रोटीज़ोम नियामक प्रोटीनों द्वारा प्रोटीज़ोम के सक्रियण को भी अवरुद्ध किया। ये परिणाम सुझाव देते हैं कि PI31 प्रोटीज़ोम कार्य के नियंत्रण में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जिसमें प्रोटीन विघटन के यूबिक्विटिन-निर्भर पथ भी शामिल हैं।