트리클로로아세틱산 유도 단백질 침전은 안정한 부분 구조 중간체의 가역적 결합을 포함합니다.

단백질체 분석을 위한 샘플 준비는 2,2,2-트리클로로아세틱산(TCA)을 이용한 단백질 침전에 관련됩니다. 본 연구에서는 TCA 유도 단백질 침전 반응의 메커니즘을 조사합니다. TCA 유도 단백질 침전 곡선은 U자 형태이며, 곡선의 형태는 단백질의 물리화학적 특성과 무관한 것으로 관찰됩니다. TCA는 단백질의 unfolded 상태를 침전시키는 데 상당히 덜 효과적입니다. 산성 섬유아세포 성장 인자(aFGF)를 사용한 1-anilino-8-naphthalene sulfonate(ANS) 및 크기 배제 크로마토그래피 결과는 안정한 "용융 globule-like" 부분 구조 중간체가 5% (w/v) 트리클로로아세테이트에서 최대 축적됨을 보여줍니다. 요소 유도 unfolding 및 제한적 단백질 소화 데이터는 부분 구조 중간체가 원형 대비 상당히 덜 안정적임을 나타냅니다. (1)H-(15)N 화학 이동 교란 데이터는 NMR 분광법을 사용하여 얻은 것으로, aFGF의 N-말단과 C-말단에서 베타 스트랜드를 안정화하는 상호작용이 트리클로로아세테이트 유도 "MG-like" 상태에서 파괴됨을 나타냅니다. 본 연구의 결과는 TCA 유도 단백질 침전이 "MG-like" 부분 구조 중간체 상태들의 가역적 결합으로 인해 발생한다는 점을 명확히 보여줍니다. 우리는 이 연구의 결과가 전체 단백질체의 분리 및 분석을 위한 효율적인 프로토콜 개발에 유용한 단서를 제공한다고 생각합니다.