Purificación de la telomerasa de Euplotes aediculatus: requerimiento de un extremo sobrante 3'.

La telomerasa es una enzima ribonucleoproteica que utiliza su fracción de ARN interno como plantilla para la síntesis de repeticiones teloméricas en los extremos de los cromosomas. Aquí informamos sobre la purificación de la telomerasa de Euplotes aediculatus mediante cromatografía de afinidad con oligonucleótidos antisentido 2'-O-metilo, un método que fue desarrollado para partículas ribonucleoproteicas nucleares pequeñas (snRNPs). La elución de ribonucleoproteínas unidas al oligonucleótido antisentido en condiciones no desnaturalizantes se logró mediante un enfoque novedoso, utilizando un oligonucleótido de desplazamiento. Polipéptidos de 120 kDa y 43 kDa (un doblete) co-purifican con la telomerasa activa y aparecen estequiométricos con el ARN de telomerasa. Un modelo simple para la replicación de extremos de ADN predice que, después de la replicación semiconservativa del ADN, la telomerasa extenderá la hebra líder recién sintetizada y de extremo romo. Mostramos que la telomerasa purificada de Euplotes no tiene actividad con cebadores de extremo romo. En cambio, la extensión eficiente requiere de 4 a 6 nucleótidos de cadena sencilla en el extremo 3'. Por lo tanto, este modelo predice la existencia de otras actividades como helicasas o nucleasas que generan un extremo de 3' de cadena sencilla a partir de un extremo romo, activando así el extremo para la extensión de la telomerasa.