Macrófagos derivado de médula ósea murina

La línea filogenética molecular de los fagocitos comprende, en orden de madurez creciente, la célula madre comprometida de macrófago, el monoblasto, el promonocito, el monocito y el macrófago. Los métodos para la preparación y cultivo de macrófagos derivados de médula ósea, desarrollados por Stanley y colegas (1-3), proporcionan grandes cantidades de fagocitos mononucleares que son capaces de una amplia proliferación celular. Dado que su proliferación puede ser estimulada por el factor estimulante de colonias-1 (CSF-1), el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), o la interleucina-3 (IL-3), representan una importante fuente celular primaria para estudios de las acciones e interacciones de estos tres factores de crecimiento. Los principios subyacentes al método son: (1) generar y expandir células madre de fagocitos mononucleares primitivas cultivando células de médula ósea en una combinación de CSF-1 y IL-3 parcialmente purificados durante un período de 3 días, (2) eliminar células rojas contaminantes, fibroblastos y macrófagos maduros y disolver agregados de células proliferantes, mediante digestión proteolítica de las células no adherentes en los días 1 y 3 de cultivo y, (3) obtener una población de fagocitos mononucleares que sea relativamente homogénea con respecto a su estado de diferenciación al recuperar solo aquellas células (es decir, monoblastos, promonocitos) que adquieren la capacidad de adherirse al plástico de cultivo celular durante los días 4-5 de cultivo.