Complexos covalentes de proteína-DNA nos terminais da fitas 5' de quebras de dupla fita específicas de meiose em leveduras.

Durante a meiose em Saccharomyces cerevisiae, o primeiro passo químico na recombinação homóloga é a ocorrência de quebras de dupla fita de DNA (DSBs) específicas de sítio. Em células selvagens, essas quebras passam por ressecção de seus terminais de fita 5' para gerar moléculas com caudas de fita simples 3'. Caraterizamos mais as quebras que se acumulam em manchas mutantes rad50S defeituosas na ressecção de DSB. Descobrimos que essas DSBs estão intimamente associadas a proteínas através do que parece ser uma ligação covalente. Quando o DNA genômico é preparado a partir de culturas de rad50S meióticas sem etapas de tratamento com protease, os fragmentos de restrição diagnósticos de DSBs se partitionam seletivamente na interfase orgânica-aquosa em extrações com fenol e se posicionam a uma densidade inferior à normal em gradientes de densidade de CsCl. A partição seletiva e a diminuição da densidade de flutuação são abolidas se o DNA for tratado com proteinase K antes da análise. Resultados semelhantes são obtidos com manchas mutantes sae2-1, que têm fenótipos idênticos aos de mutantes rad50S. A proteína está ligada especificamente aos terminais da fita 5' de DSBs e está presente em ambas as extremidades 5' em pelo menos uma fração das quebras. A estabilidade do complexo a vários desnaturantes de proteínas e a especificidade de fita da ligação são consistentes com uma ligação covalente aos terminais de DSB. Propomos que a proteína associada a DSB é a subunidade catalítica da nucleasse de inibição da recombinação meiótica e que ela cliva DNA via um intermediário covalente proteína-DNA.