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La entrega transitoria de efectores de edición del genoma basados en CRISPR es importante para reducir los efectos fuera del objetivo y las respuestas inmunitarias. Recientemente se han explorado las vesículas extracelulares (EVs) para la entrega de ribonucleoproteínas (RNP) Cas9. Sin embargo, la falta de mecanismos para enriquecer RNPs en EVs limitó la eficiencia de las EVs como vehículo de entrega de RNP. Aquí describimos un mecanismo para enriquecer activamente RNPs en EVs. Utilizamos la interacción específica entre el aptámero de ARN y la proteína de unión al aptámero (ABP) para enriquecer RNPs en EVs. Insertamos el aptámero de ARN com en el ARN guía único (sgRNA), y fusionamos el ABP del com a ambos extremos de la proteína tetraspanina CD63, que es abundante en exosomas. Encontramos que la interacción Com/com enriquecía RNPs de Cas9 y el editor de bases de adenina (ABE) en EVs, mediante la formación de un complejo de tres componentes que incluye la proteína de fusión CD63-Com, sgRNA modificado por com y Cas9 o ABE. Las EVs enriquecidas en RNP son eficientes en la edición del genoma y se expresan de forma transitoria. El sistema es capaz de entregar RNPs dirigidos a múltiples loci para la edición múltiple del genoma. Además, Cas9 de diferentes especies puede usarse conjuntamente. Las RNPs entregadas por EV son activas in vivo. Los datos muestran que las interacciones entre el aptámero y ABP pueden ser utilizadas para enriquecer activamente RNPs en EVs para mejorar la eficiencia y seguridad de la edición genética.
Yao et al. (Mon,) estudiaron esta cuestión.