Hohes Niveau endothelspezifischer Genexpression durch eine Kombination aus der 5' flankierenden Region und der 5' Hälfte des ersten Introns des VE-Cadherin-Gens

Um ein Werkzeug zu entwickeln, das ein hohes Niveau der Genexpression spezifisch in Endothelzellen (ECs) ermöglicht, bewerteten wir die Enhancer-Aktivität von Fragmenten im ersten Intron des VE-Cadherin-Gens unter Verwendung von 3 verschiedenen experimentellen Systemen: Luciferase-Assay in der F2-EC-Linie, Expression von grün fluoreszierendem Protein (GFP) in ECs, die in der Differenzierungskultur von embryonalen Stammzellen (ES) erzeugt wurden, und GFP-Expression in transgenen Mäusen. Obwohl die 2,5-kbp (Kilobase-Paar) 5' flankierende Sequenz des VE-Cadherin-Gens EC-spezifisch ist, beeinflusste die Hinzufügung von 4 kbp der 5' Hälfte des ersten Introns eine Verbesserung des Niveaus der Genexpression in allen 3 Assaysystemen. Keine anderen getesteten Fragmente in dieser Studie konnten solche Effekte hervorrufen. Im Vergleich zu anderen Genexpressions-Einheiten wäre die in dieser Studie beschriebene Einheit die optimalste, die bisher für die EC-spezifische Genexpression verfügbar ist. Da diese Einheit Gene in VE-Cadherin(+) Vorläufern von hämatopoetischen Zellen, jedoch nicht in vollständig engagierten hämatopoetischen Zellen exprimieren kann, wird sie nützlich sein, um spezifisch die unengagierte Vorläuferstufe während der Differenzierung hämatopoetischer Zellen zu manipulieren.