細胞性および循環miRNA回収率の評価：RNA抽出法および投入材料量の影響

マイクロRNA（miRNA）は、有望ながんバイオマーカーとして注目されています。しかし、その情報価値を活かすには、検出法の慎重な最適化が必要です。本研究では、単一遺伝子RT-qPCRおよびmiRNAプロファイリングを用いて、細胞、血漿、ならびに尿／血漿由来エキソソームからのmiRNA回収における、一般的に使用されるRNA抽出キットの効率を比較しました。投入材料の量がmiRNA抽出に及ぼす影響を調べるため、出発材料の量を段階的に増やして使用しました。その結果、miRNAの回収率は抽出方法および投入材料の量によって大きく左右されることが示されました。特に、miRCURY™キットは高純度のRNAをもたらしました。しかし、そのカラムは微量の細胞および血漿からのmiRNA回収率が低く、高分子RNA種や血漿成分によって速やかに飽和したため、高投入量からのmiRNA回収が妨げられました。全体として、miRNeasy®キットは抽出されたRNAの純度は低かったものの、より良好なmiRNA検出を可能にしました。それにもかかわらず、一部のmiRNAはいずれかの方法によって優先的または排他的に単離されました。Trizol® LSではRNAの純度が非常に低く、RT-qPCRの効率に影響を及ぼしました。一般に、miRCURY™ biofluidsキットは血漿から効率的にmiRNAを抽出しました。偏った結果を避けるために、RNA抽出法の慎重な選択、ならびに投入材料の種類と量の考慮が強く推奨されます。