羊舍病毒（Flock House Virus）RNA聚合酶是一种跨膜蛋白，其氨基端序列足以介导线粒体定位和膜插入

RNA复制定位于细胞内膜是正链RNA病毒的普遍特征。作为研究最广泛的α诺达病毒（alphanodavirus），羊舍病毒（FHV）的复制复合物位于受感染黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）细胞的线粒体外膜上，并与膜结合球状小体的形成相关，这与在许多其他正链RNA病毒中发现的结构类似。为了进一步研究FHV复制复合物的形成，我们在能够支持FHV全RNA复制和病毒体形成的宿主酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中，研究了FHV依赖RNA的RNA聚合酶——蛋白A的亚细胞定位、膜结合及膜拓扑结构。共聚焦免疫荧光显示，与在果蝇细胞中一样，蛋白A在酵母中定位于线粒体，且这种线粒体定位独立于病毒RNA的合成。Nycodenz梯度浮选和解离实验表明，蛋白A表现为整合膜蛋白，这一发现与预测的N端近端跨膜结构域一致。差异表位标记后的蛋白酶消化和选择性透化实验表明，蛋白A插入线粒体外膜，其N端位于膜间隙或基质中，而C端暴露于细胞质。缺失突变体的浮选和免疫荧光研究表明，蛋白A的N端近端区域对于膜结合和线粒体定位均非常重要。利用绿色荧光蛋白融合的功能获得性研究表明，蛋白A的N端46个氨基酸足以介导线粒体定位和膜插入。我们得出结论，蛋白A部分通过N端近端的线粒体定位信号和跨膜结构域，将FHV RNA复制复合物靶向并锚定至线粒体外膜。