Enzimas de ramificación de almidón de semillas inmaduras de arroz

Se separaron aparentemente cuatro formas de la enzima de ramificación, denominadas RBE1, RBE2 (una mezcla de RBE2A y RBE2B), RBE3 y RBE4, mediante cromatografía en columna de DEAE-celulosa de extracto soluble de semillas de arroz inmaduras, y cada una de estas cuatro formas fue purificada aún más por filtración en gel. RBE1, RBE2A y RBE2B fueron las formas predominantes de la enzima. El tamaño molecular, la secuencia de aminoácidos en el terminal amino y la inmunoreactividad con el anticuerpo anti-enzima de ramificación de maíz-I (BE-I) fueron idénticos entre estas tres formas, excepto que la masa molecular de RBE2A fue casi 3 kDa más alta que las de RBE1 y RBE2B. Estos resultados indican que RBE1, RBE2A y RBE2B son la misma (denominada arroz BE-I). Se han identificado los clones de cDNA que codifican para arroz BE-I de una biblioteca de semillas de arroz en lambda gt11, utilizando el cDNA de maíz BE-I como sonda. La secuencia de nucleótidos indica que el arroz BE-I se sintetiza inicialmente como una proteína precursora de 820 residuos, que incluye un péptido de tránsito putativo de 64 o 66 residuos en el terminal amino. El arroz BE-I maduro contiene 756 (o 754) aminoácidos con una masa molecular calculada de 86,734 (o 86,502) Da, y comparte un alto grado de identidad de secuencia (86%) con la proteína de maíz. Las secuencias consenso de las cuatro regiones que forman los sitios catalíticos de las enzimas amiloilolíticas están conservadas en la región central de la secuencia de arroz BE-I. Así, el arroz BE-I, así como la proteína de maíz, pertenece a una familia de enzimas amiloilolíticas.