シアノバクテリアの概日時計のリアルタイム生体外蛍光異方性

シアノバクテリアの概日時計は、ライブ細胞の複雑な環境の外で再構築できる点で独特であり、機能する生物学的クロノメーターの調査が大幅に簡素化されます。コアオシレーターの構成要素は、KaiA、KaiB、KaiCの3つのタンパク質のみで構成され、ATPと共に、KaiCのリン酸化リズムを駆動する組み立てと解体の波を経ます。通常、これらの反応の時間点は、異なるリン酸化状態を解決するこの技術によって、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって事後的に分析されます。ここでは、時計反応をリアルタイムでモニタリングするより感度の高い方法を説明します。一つの時計タンパク質、今回はKaiBに蛍光標識を付けることで、体外時計反応を数分間の時間スケールで数週間にわたり蛍光異方性でモニタリングできます。