Sequencing of Mitochondrial Cytochrome b Genes for the Identification of Meat Species

DNAの塩基配列の違いに基づいて食肉の原材料を決定するため,食用とされる可能性のある動物種から,ミトコンドリアのシトクロムb遺伝子をPCRで増幅し,塩基配列を決定した.PCRに用いたプライマー,MI1(5'-CAAATCCTCACAGGCCTATTCCTAGC-3'), MI2 (5'-TAGGCGA-ATAGGAAATATCATTCGGGTTTGAT-3')は,発表されているウシ,ヒト,マウス,ニワトリのシトクロムb遺伝子の配列からよく保存されている領域を選び,共通性の高い配列とした.試験対象とした8種の哺乳類と5種の鳥類からシトクロムb遺伝子の中央部分646塩基を増幅し,ダイターミネーターサイクルシーケンス法(ABI)でPCR産物の塩基配列を決定した.本試験で決定したウシの塩基配列は,すでに発表されているウシのシトクロムb遺伝子の塩基配列と一致し,ヒッジ,ヤギ,ブタ,ニワトリも発表されている塩基配列とほとんど一致していた.今回決定した塩基配列と発表されている配列との間で異なっていた塩基の数は646塩基中,7(ヒツジ),16(ヤギ),2(ブタ),3(ニワトリ)塩基であった.一方,類縁関係の近いニホンカモシカ,ヒツジ,ヤギの間で塩基配列を比較すると,3種の間で67-72塩基の違いがあり,塩基配列によって種を判別することは容易であった.簡易法として,PCR産物の制限酵素Taq I, Alu I,Hae III切断パターンから種を同定することも可能であった.