成人マウス網膜へのMACS精製光受容体前駆細胞の網膜下移植

光受容体、すなわち視網膜の光感知細胞の喪失による視覚障害と失明は、工業化された国々における障害の主な理由です。変性した光受容体を細胞移植によって置き換えることは、将来の臨床応用における可能な治療法を示しています。実際、最近の前臨床研究は、出生後4日目の新生マウス網膜から分離された未熟な光受容体が、網膜下移植後に成人マウス網膜に統合される可能性があることを示しました。ドナー細胞は、内外セグメントを含む成熟した光受容体形態を生成し、外核層に位置する丸い細胞体、および内因性双極細胞に近接したシナプス末端を形成しました。実際、最近の報告は、ドナー光受容体が宿主マウスの神経回路に機能的に統合されることを示しています。このような細胞置換アプローチの将来の臨床応用のためには、選択された細胞の純化された懸濁液を生成し、眼に正しく統合される位置に配置する必要があります。光受容体前駆体の濃縮のためには、特定の細胞表面抗原に基づいたソーティングを行い、ドナー細胞の遺伝子レポータ修飾を回避する必要があります。ここでは、細胞表面マーカーCD73に基づいて、光受容体特異的レポーターマウスの新生網膜から分離された移植可能な杆状光受容体前駆体の濃縮における磁気関連細胞ソーティング（MACS）を示します。抗CD73抗体によるインキュベーションの後、マイクロビーズ結合二次抗体により、MACSを用いた杆状光受容体前駆体の濃縮が約90%達成されました。フローサイトメトリーと比較して、MACSはGMP基準に容易に適用でき、相対的に短い時間内に大量の細胞をソートできるという利点があります。濃縮した細胞懸濁液を成人の野生型マウスの網膜下空間に注入した結果、混合されていない細胞懸濁液と比較して、3倍高い統合率が得られました。