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Die Implementierung der Nanoflow-Flüssigkeitschromatographie bietet einzigartige Möglichkeiten zur Automatisierung der Proteomforschung. Wir zeigen, dass die automatisierte Nanoflow-LC/MS/MS die eindeutige Identifikation von Proteinen aus dem omnipotenten Bakterium Shewanella putrefaciens ermöglichte, basierend auf Ähnlichkeitssuchen gegen das vollständig bestimmte Genom verwandter Mikroorganismen und gegen nicht-redundante Datenbanken. Gesamte Proteinauszüge wurden durch zweidimensionale Polyacrylamid-Elektrophorese getrennt. Nur 1/20 eines tryptischen Verdaugemischs, das aus einem einzigen Coomassie-Blau gefärbten Fleck gewonnen wurde, wurde auf die Nanoflow-LC-Säule geladen, wobei ein Voranreicherungs-/Entsalzungsstep verwendet wurde, und online auf einem hybriden Quadrupol-Zeitflughybridmassenspektrometer mit einem automatisierten MS-zu-MS/MS-Umschaltprotokoll analysiert. Dieses Verfahren ermöglichte die de novo Bestimmung der Peptidsequenz mehrerer tryptischer Fragmente und die Identifikation verschiedener Proteine. Urheberrecht © 2000 John Wiley & Sons, Ltd.
Devreese et al. (Sa,) haben diese Frage untersucht.